من انا

صورتي
الرياض, Saudi Arabia
مسلم، وأناأحوج ما أكون إلى معرفة نفسي

السبت، 27 نوفمبر، 2010

الفطريات Fungi

الفطريات Fungi عبارة عن كائنات حية غير متحركة ، حقيقية النواة Eukaryotic   لا تحتوي على صبغة الكلوروفيل أى أنها كائنات غير ذاتية التغذية Heterotrophic  لذا فهي إما أن تعيش مترممه على البقايا الميته للكائنات الحية سواء نباتية أوحيوانية (فطريات مترممة Saprophytic fungi), أوتعيش متطفلة على عوائل حية حيوانية أو نباتية (فطريات طفيلية Parasitic fungi). وهى كائنات واسعة الإنتشار وتتواجد بصفة عامة فى جميع المناطق التي تتوافر بها الرطوبة والحرارة المناسبتين ، فهى توجد في التربة والهواء والمياه العذبة والمالحة.

بعض الفطريات وحيدة الخلية تتركب من خلية واحدة فقط تقوم بجميع الوظائف الحيوية (مثل الخميرةSaccharomyces ) ولكن معظمها كائنات عديدة الخلايا أى تتركب من عدة خلايا منتظمة في خيط فطري (  يسمى الهيفاHyphae ) وتشكل هذه الهيفات فى مجملها مايسمى بالغزل الفطري (الميسليوم  Mycelium) ويمكن أن تكون الهيفات مقسمة بواسطة جدر أو حواجز عرضية ( Septum) ويمكن أن لا تكون مقسمة بدون هذه الحواجز وعندها تكون ( مدمج خلوي Coenocytic).  تتكاثر الفطريات لاجنسياً بعدة طرق منها التبرعم Budding أو الإنشطار Fusion أو التفتت  Fragmentation  أو بتكوين الجراثيم الكلاميدية (Clamidio spores) أو الجراثيم الخارجية (Conidia) أو الجراثيم الداخلية Sporangio spores.

الفطريات شائعة الوجود فلا تخلو منها بيئة. فيمكن عزل العديد من الفطريات من التربة ومن الهواء ومن الماء وأينما وجدت المادة العضوية. وتختلف نوعية الفطريات المعزولة تبعاً لنوع التربة ونسبة الرطوبة بها وكذلك تبعاً لنوع المحصول المزروع على التربة. كما يمكن عزل العديد من الفطريات من التربة والهواء ومن أسطح النباتات ومن جلد الإنسان والحيوان. والفطريات مسئولة عن العديد من الأمراض التي تصيب النباتات في الحقول وفي المخازن، كذلك تسبب تلف الأغذية المحفوظة والمنتجات الغنية بالمادة العضوية. ومن أشهر أنواع الفطريات الخمائر التي تلعب دوراً هاماً في عملية التخمر في العديد من الأوساط الغذائية.

 تلعب الفطريات دوراً هاماً فى الطبيعة حيث يعزى اليها حدوث العديد من الظواهر البيئية التى يعتبر بعضها عظيم الفائدة للبيئة بينما يعتبر البعض الآخر بالغ الضرر. وتقتضى الضرورة عزل وإنماء الفطريات فى بيئات نقية والإحتفاظ بها فى هذه البيئات وعمل الدراسات المختلفة مثل قياسات النمو واختبارات التجرثم والإنبات وغيرها من الدراسات المختلفة وكذلك دراسة تاريخ الحياة لهده الفطريات وطرق التطفل والتغدية. وتوجد طرق عديدة لعزل الفطريات من أماكن تواجدها وحفظها على حالة نقية وتختلف طرق العزل بإختلاف نوع الفطر واحتياجاته البيئية والوسط الموجود به. وهناك عدة طرق لعزل الفطريات على حالة نقية وتختلف طرق العزل واختيار الطريقة الملائمة للعزل على عدة عوامل هامة هى طريقة نمو الفطر فالفطريات التى تتطفل على النبات خارجياً يمكن عزلها بسهولة أكثر من الفطريات التى تنمو داخل أو بين أنسجة النبات وكذلك تختلف طريقة العزل حسب طور النمو هل هو ميسيليوم أو جراثيم أو تراكيب ثمرية أو غيرها وكذلك حسب نوع المزرعة التى ينمو عليها الفطر هل هى مزرعة سائلة أم صلبة.
ومن أهم الصعوبات التى توجه الباحث عند إجراء العزل هى احتمال التلوث بكائنات أخرى بخلاف الكائن الذى يراد عزله ولذلك يجب أن يكون هناك إحتياطات يجب مراعاتها قبل إجراء عملية العزل مثل تعقيم الحجرة التى يقوم الباحث بعزل الفطريات فيها وذلك باستخدام الفورمالين وكذلك تعقيم جميع الأدوات المستخدة فى العزل من مشارط وملاقط  وإبر وأدوات زجاجية وغيرها كما يجب أن تتم جميع إجراءات العزل والتنقية والنقل فى أماكن معقمة لجنب حدوث تلوث.














الإعتبارات الواجب مراعاتها عند عزل الفطريات

هناك عدة اعتبارات يجب الإلمام بها عند الرغبة فى عزل وزراعة الفطريات فى مزارع صناعية ولعل من أهم تلك الاعتبارات تحديد البيئات المزرعية المناسبة وكذلك توافر وسائل تعقيم مثلى لتعقيم تلك البيئات والأدوات المعملية المستخدمة فى عمليات العزل والزراعة والحفظ.

أولاً: البيئات المغذية Media

يتحتم على الباحثين فى مجال الفطريات التعرف على ماهية البيئات المزرعية المستخدمة فى عزل زراعة الفطريات المختلفة والتى تنقسم بشكل عام إلى ثلاثة أنواع رئيسية وهى:
1-   بيئات طبيعية Natural media
2-   بيئات شبه مركبة Semi synthetic media
3-   بيئات مركبة Synthetic media

1- البيئات الطبيعية Natural media

هى بيئات تتكون من مواد طبيعية غير معروفة التركيب ذات أصول نباتية أوحيونية ومن أمثلتها بيئة البطاطس ومستخلص المولت ومستخلص الخميرة والببتون وبيئة الذرة غيرها من مستخلصات الأوراق أو الثمارالنباتية والتى تتميز بسهوله تحضيرها وصلاحيتها لنمو العديد من الفطريات.

بيئة آجار البطاطس Potato agar
وتتكون من:
بطاطس                200 جرام.
آجار           15-20 جرام.
ماء            1000سم3.

 ويتم تحضيرها بتقشير البطاطس وغسلها جيداً وتقطيعها إلى قطع صغيرة ووزنها ثم وضعها فى كأس زجاجى ويضاف عليها كمية كافية من الماء وتغلى لمدة نصف ساعة ثم تصفى جيداً باستخدام قماش شاش نظيف ثم يكمل المستخلص الى 1000سم ويضاف الآجار ثم تعقم.


 بيئة آجار المولت Malt extract agar
وتتكون من:
مستخلص مولت       200 جرام.
آجار                   15-20 جرام.
ماء                    1000سم3.

2- البيئات شبه المركبة Semi synthetic media

هى بيئات تتكون من مواد طبيعية غير معروفة التركيب ومواد أخرى محددة التركيب ومن أمثلتها بيئة أجار البطاطس والدكستروز .

بيئة آجار البطاطس والدكستروز Potato dextrose agar
وتتكون من:
بطاطس                200 جرام.
آجار           15-20 جرام.
ماء            1000سم3.
 ويتم تحضيرها كما سبق ذكره .

3- البيئات المركبة Synthetic media

تتكون هذه البيئات من مواد عضوية أو غير عضوية معروفة التركيب الكيماوى وبتركيز معلوم ويجب أن تكون تلك المواد على درجة عالية من النقاوة وصالحة للإغراض المعملية ومن أمثلتها بيئة ريتشارد وبيئة تشابك. وهناك العديد من أنواع البيئات المستخدمة لعزل الفطريات منها ماهو متخصص يصلح لعزل أنواع بعينها من الفطريات ومنها ماهو صالح لعزل العديد من الأنواع الفطرية المختلفة. 

ثانياً: التعقيم Sterilization

يقصد بعملية التعقيم الإجراءات المتبعة لجعل مادة ما أو مكان ما خالى تماماً من الكائنات الحية الدقيقة أو وحداتها التكاثرية Germ free ويتحتم على الباحث فى مجال الفطريات التعرف على طرق التعقيم المثلى التى يجب إتباعها قبل البدء فى عملية العزل. ومن أهم طرق التعقيم المتبعة فى معامل الفطريات مايلى:

1- التعقيم بالحرارة (الجافة – المصحوبة برطوب).
2- التعقيم بالمطهرات الكيماوية.
3- التعقيم بالإشعاع.
4- التعقيم بالترشيح.

ثالثاً: عزل الفطريات من بيئتها الطبيعية Isolation of fungi

1- عزل فطريات التربة :

أ – العزل المباشر:

 تؤخذ كمية مناسبة من التربة بواسطة مقبض معقم إلى وتنثر على سطح طبق بتري يحتوى على بيئة أجار وتحضن على درجة 25±5 لمدة 24-48 ساعة بعدها يفحص الطبق وتحدد المستعرات الفطرية المنفردة النامية وتنقل إلى بيئة جديدة.


                               


شكل (1) : عزل مباشر لفطريات التربة.


ب – أطباق التربة:

وفيها يتم توخذ عينة صغيرة من التربة ويحضر منها معلق يتم توزيعة داخل طبق بتري معقم، ثم يصب عليها طبقة رقيقة من الأجار المائى. ثم يحرك الطبق حركة رحوية حتى يتم توزيع حبيبات التربة داخل البيئة بشكل منتظم. تحضن الأطباق بعد تصلبها على درجة 25±5 لمدة 24-48 ساعة وتراقب طوال فترة التحضين ثم يتم نقل المستعمرات الفطرية المثلى إلى بيئات أخرى.


         





شكل (2) : عزل فطريات التربة بطريقة أطباق التربة.





تنقية المزارع الفطرية Purification of fungal cultures

يعتبر عزل وانماء الفطريات فى بيئات نقية والاحتفاظ بها فى هذه البيئات من الدراسات المهمة لعمل الدراسات المختلفة مثل النمو والتجرثم والنبات وغيرها من الدراسات المختلفة وكذلك دراسة تاريخ الحياة لهذه الفطريات وطرق التطفل والتغذية.

مزارع الجرثومة المفردة  Single spore cultures:

 يلزم فى بعض الأحيان الحصول على مزرعة نقية نامية من جرثومة واحدة ويحتاج ذلك إلى تكنيك خاص حيث تؤخذ الجرثيم المفردة بطريقة ما وتزرع على طبق بترى يحتوى على بيئة مناسبة لنموها. وتتباين الطرق المتبعة بتباين نوع الفطر وطبيعة التجرثم فمثلاً فى حالة الفطريات التى تكون جراثيم حرة على أسطح مزارعها يمكن الحصول على مزرعة نقية كما يلى:-
 
الطريقة الأولى:-
1-  يتم تحضير معلق جراثيم معلوم التركيز من المزرعة الفطرية.
2- يتم غمس ابرة تلقيح ذات حلقة فى هذا المعلق ويجرى تخطيط خفيف على سطح بيئة الآجار المصبوبة فى أطباق بترى بهذه الإبرة فى صورة خط متعرج.
3- يتم تخطيط 3-4 أطباق بنفس اللقاح المأخوذ بالأبرة فى المرة الواحدة ويكون التخطيط برفق منعاً لتجريح سطح الآجار.
4-  تقلب الأطباق وتفحص مقلوبة بعد التخطيط تحت الميكروسكوب ويتم تحديد بعض الجراثيم المنفردة وخصوصاً فى المكررة الرابعة أو الثالثة.
5-  تحضن الأطباق على درجة الحرارة المناسبة للفطر على ان تفحص كل 8-12 ساعة لمراقبة إنبات الجراثيم.
6-  تنقل الجراثيم النابتة إلى بيئة أجار جديدة لإستكمال نموها.
7-  تفحص المزارع الناتجة وتقل على سطح آجار مائل للحفظ.



مزارع أطراف الهيفات  Hyphal tip cultures.

1- وتستخدم هذه الطريقة فى حالة الفطريات النى لاتكون جراثيم بسهولة وبوفرة على مزارعها وفيها ينمى الفطر على بيئة مناسبة لنموه حتى قدر معين من النمو.
2- تستخدم أنبوبة زجاجية رقيقة معقمة Capillary glass tube  لفصل جزء صغير من طرف هيفا مفردة بعد تحديد نهايات أطراف النمو للمزرعة تحت الميكروسكوب والتى تظهر متباعدة بشكل ممكن تمييزة.
3- تنقل طرف الهيفا المقطوعة إلى بيئة آجار مناسبة على طبق بترى ثم تحضن على درجة الحرارة المناسبة للنمو للحصول على مزرعة جديدة نقية.

خامساً: تعريف الفطريات.

بعد الإنتهاء من عملية العزل والحصول على المزرعة يتم تعريف الفطريات المعزولة بشكل مبدأى من خلال الخصائص المورفولوجية والخصائص المجهرية للمزرعة الفطرية.
  
الخصائص المورفولوجية : يتم فحص مزرعة الفطر (على البيئة الصلبة) مورفولوجياً وتسجل الخصائص المورفولوجية المميزة مثل لون المزرعة ـ طبيعة نمو الفطرعلى بيئة الآجارـ كثافة النموـ شكل الحافة. ثم يراقب مدى تغير لون المزارع مع مرور الوقت من عدمه.

الخصائص المجهرية : حيث تحضر شرائح من النمو الفطرى وتصبغ بصبغة اللاكتوفينول وتفحص جيداً تحت المجهر ويتم تسجيل الخصائص المجهرية للمزرعة (شكل الهيفات ـ شكل الجراثيم ـ قياسات الجراثيم).

ليست هناك تعليقات: